PCR基因擴增儀現(xiàn)象是細(xì)胞發(fā)育到特定階段的需要,是細(xì)胞在給定時間內(nèi)大量擴增基因序列、產(chǎn)生大量轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的一種有效手段。在卵母細(xì)胞的成熟過程中,擴增出大量的基因序列,用于基因轉(zhuǎn)錄,貯備大量的RNA轉(zhuǎn)錄本供受精后的早期使用,對于受精卵早期的蛋白質(zhì)合成及其生命活動的正常執(zhí)行以及隨后的細(xì)胞分化和胚胎發(fā)育均具有極其重要的生物學(xué)意義。但擴增出的大量基因序列僅在當(dāng)代作為膜板進行轉(zhuǎn)錄用,不傳遞到下一代細(xì)胞。
PCR基因擴增儀技術(shù)(PCR)聚合酶鏈反應(yīng)又稱無細(xì)胞分子克隆系統(tǒng)或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增法,是基因擴增技術(shù)的一次重大革新??蓪O微量的靶DNA特異地擴增上百萬倍,從而大大提高對DNA分子的分析和檢測能力,能檢測單分子DNA或?qū)γ?0萬個細(xì)胞中僅含1個靶DNA分子的樣品,因而此方法立即在分子生物學(xué)、微生物學(xué)、醫(yī)學(xué)及遺傳學(xué)等多領(lǐng)域廣泛應(yīng)用和迅速發(fā)展。由于PCR具有敏感性高、特異性強、快速、簡便等優(yōu)點,已在病原微生物學(xué)領(lǐng)域中顯示出巨大的應(yīng)用價值和廣闊的發(fā)展前景。
實驗室工作導(dǎo)則
臨床PCR基因擴增儀檢驗實驗室的設(shè)計
?。ㄒ唬┡R床基因擴增檢驗實驗室區(qū)域設(shè)計原則。原則上臨床基因擴增檢驗實驗室應(yīng)當(dāng)設(shè)臵以下區(qū)域:試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。這4個區(qū)域在物理空間上必須是*相互獨立的,各區(qū)域無論是在空間上還是在使用中,應(yīng)當(dāng)始終處于*的分隔狀態(tài),不能有空氣的直接相通。根據(jù)使用儀器的功能,區(qū)域可適當(dāng)合并。例如使用實時熒光PCR儀,擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并;采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀,則標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。各區(qū)的功能是:
1.試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū):貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備,以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。
2.標(biāo)本制備區(qū):核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管。對于涉及臨床樣本的操作,應(yīng)符合生物安全二級實驗室防護設(shè)備、個人防護和操作規(guī)范的要求。
3.擴增區(qū):cDNA合成、DNA擴增及檢測。
4.擴增產(chǎn)物分析區(qū):擴增片段的進一步分析測定,如雜交、酶切電泳、變性液相分析、測序等。
?。ǘ┡R床PCR基因擴增儀檢驗實驗室的空氣流向。臨床基因擴增檢驗實驗室的空氣流向可按照試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)進行,防止擴增產(chǎn)物順空氣氣流進入擴增前的區(qū)域??砂凑諒脑噭﹥Υ婧蜏?zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)方向空氣壓力遞減的方式進行。可通過安裝排風(fēng)扇、負(fù)壓排風(fēng)裝臵或其他可行的方式實現(xiàn)。